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肺腺癌及肺鳞癌MRP-mRNA的表达及临床意义
军医进修学院学报2000年第21卷第1期
杨俊兰 石廷章 魏秀芳
摘 要：目的：观察 30例肺癌组织及癌旁肺组织MRP的表达。方法：RT-PCR方法。结果：43.33%的肺癌组织表达MRP，且MRP的表达与细胞分化程度有关，低分化者MRP的表达明显高于中高分化者(P＜0.05)。腺癌的表达(62.5%)高于鳞癌(21.43%，P＝0.058)。MRP的表达与临床分期无关(P＝0.511)。结论：43.33%的肺癌组织表达MRP，MRP的表达可能与肺癌的耐药有关。
关键词：多药耐药相关蛋白；肺腺癌；肺鳞癌
多药耐药相关蛋白(MRP)是近年发现的一种与肿瘤多药耐药有关的糖蛋白，文献报道MRP表达与肿瘤的分化、分期及预后有关。目前国内尚未见有关肺癌组织MRP的研究。作者检测了30例肺癌组织及肺正常组织MRP的表达情况，报告如下。
1 材料和方法
1.1 临床资料 30例肺癌标本均为外科肺癌手术患者，每例患者均同时取距癌肿≥3cm的肺组织，手术后立即取材并储存于液氮罐中。30例患者中：男性24例、女性6例。年龄范围：35～68岁，平均年龄55.31岁；其中：鳞癌14例、腺癌16例。根据肿瘤的分级标准［1］，14例鳞癌中：中～高分化者8例，低分化者6例；16例腺癌中：中～高分化者9例，低分化者7例。所有患者术前均未进行任何抗肿瘤治疗。
1.2 MRP引物序列
5′ACACTCCACAGATCACTC3′
5′CATGGTGCAGGGTCTACG3′
扩增片段为290bp
1.3 步骤
1.3.1 总RNA提取 取新鲜组织2～3mg，捣碎后，置样品管中，加入200μl裂解液，充分震荡，使沉淀完全溶解，加入40μl氯仿混匀，12000r/min离心5min，小心吸取上层水相，加3倍体积无水乙醇，-20℃放置20min，12000r/min离心5min，弃上清，室温晾干约20min，即可得到标本的总RNA。
1.3.2 RNA-cDNA反转录 向处理好的样品中加入15μl逆转录液、1μl酶混合液，离心数秒，42℃水浴30min。
1.3.3 PCR扩增 以MRP阳性模板作为阳性对照，以DEPC水代替cDNA作为阴性对照。取反转录产物、阳性对照及阴性对照各5μl，分别加入20μlPCR液、1μlTaq酶，一滴石蜡油，离心数秒，按下述条件扩增35个循环：
94℃45s 55℃45s 72℃45s
1.3.4 电泳鉴定 含EB的2%琼脂糖配制：100mlTBE(Tris-硼酸)+2g琼脂糖+5μlEB
用10μlPCR产物、2μl上样缓冲液混匀后点样，恒压5V/cm，电泳时间为溴酚蓝染料走至1/3～1/2胶长处。
1.4 结果记录及判断 阳性结果为两条带，分别为：MRP带(290bp)，β2微球蛋白带(430bp)。阴性结果为一条带，为β2微球蛋白带(430bp)。
1.5 统计学处理采用校正卡方检验。
2 结 果
30例肺癌组织中，MRP-mRNA表达阳性者13例，其中：鳞癌3例、腺癌10例；癌旁肺组织中，MRP-mRNA表达阳性者8例，其中：鳞癌2例、腺癌6例(表1)。
表1 肺癌组织及相应癌旁肺组织MRP-mRNA表达(n=30)
| |
MRP-mRNA阳性(%) |
MRP-mRNA阴性(%) |
| 肺癌组织 |
13(43.3) |
17(56.7) |
| 癌旁肺组织 |
8(26.7) |
22(73.3) |
|
MRP的表达与临床分期无明显关系(P＝0.511)，与癌细胞的分化程度有关(P＝0.03)。病理类型显示：MRP在腺癌的表达(62.5%)高于鳞癌(21.43%)，P值未见显著性差异可能与例数较少有关(表2)。
表2 不同病理特征患者MRP-mRNA表达 |
| 病理特征 |
例数 |
MRP-mRNA |
阳性率(%) |
P |
| (+) |
(-) |
| 病理类型 |
|
|
|
|
|
| 鳞 癌 |
14 |
3 |
11 |
21.43 |
|
| 腺 癌 |
16 |
10 |
6 |
62.5 |
0.058 |
| 病理分期 |
|
|
|
|
|
| Ⅰ |
1 |
0 |
1 |
0.00 |
|
| Ⅱ |
20 |
8 |
12 |
40.00 |
|
| Ⅲ |
8 |
4 |
4 |
50.00 |
|
| Ⅳ |
1 |
1 |
0 |
100.00 |
0.511 |
| 组织分化 |
13 |
9 |
4 |
69.23 |
|
| 低分化 |
|
|
|
|
|
| 中高分化 |
17 |
4 |
13 |
23.53 |
0.03 |
3 讨 论 肺癌的耐药性有多种机制，MDR1是近10年来研究较多的一种耐药机制，随着研究的深入，人们发现MDR1的表达不足以解释非小细胞肺癌的多药耐药，而且在一些耐药的肺癌中也未发现P-gp的过度表达。自1992年Cole发现多药耐药相关蛋白(MRP)后，研究MRP与肺癌多药耐药的关系成为人们关注的热点，MRP基因位于16号染色体P13.1带上，由2.8kb碱基组成，该基因编码1531个氨基酸组成的蛋白质，其分子量为190ku碱基组成，该基因编码1531个氨基酸组成的蛋白质，其分子量为190ku，其多药耐药作用与P-gp的表达无关，而与细胞内MRP的药物泵作用及其引起细胞内药物浓度降低有关［2］，MRP的耐药谱与MDR1相仿。国外研究表明：MRP基因的表达与肺癌的分期、分化及预后有关［3～5］，也有研究认为：MRP在肺癌耐药中的作用有可能大于MDR1［6］。笔者检测了肺癌及肺正常组织MRP基因的表达情况结果表明：43.33%的肺癌组织有MRP-mRNA表达，从癌细胞分化程度可以看出：低分化者MRP-mRNA的表达(69.23%)明显高于中高分化者(23.53%，P＜0.05)，说明MRP的表达与细胞分化程度相关。本研究30例患者中，肺腺癌16例，有10例患者表达MRP，占62.5%，这与临床上肺腺癌对化疗不敏感是一致的。本研究的所有患者术前均未行任何化疗，说明MRP的表达为先天性。■
作者简介：杨俊兰，女，1964-01-06生，山西省临猗县人，1985年山西医学院毕业，1993年军医进修学院硕士毕业，解放军总医院肿瘤内科副主任医师；发表论文10篇。电话：(010)66937098
作者单位：杨俊兰（解放军总医院肿瘤科，北京 100853）
石廷章（解放军总医院肿瘤科，北京 100853）
魏秀芳（解放军总医院肿瘤科，北京 100853）
参考文献：
［1］俞孝庭.肿瘤病理学［M］.上海：科学技术出版社，1986.
［2］Grant CE, valdimarson G, Hipfner DR et al. Overexpression of multidrug resistance-associated protein (MRP) increases resistance to natural product drugs ［J］. Cancer Res, 1994,54:357-360.
［3］Higashiyama M, Doi O, Kodama K et al. Immunohistochemically detected expression of motitity-related protein-1 (MRP-1/CD9) in lung adenocarcinoma and it′s relation to prognosis［J］. Int J Cancer, 1997,74(2):205-210.
［4］Ota E, Abe Y, Oshika Y et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein (MRP) gene in non-small-cell lung cancer ［J］. br J Cancer, 1995,72(3):550-554.
［5］Nooter K, Bosman F T, Burger H, et al. Expression of the multidrug resistance-associated protein (MRP) gene in primary non-small-cell lung cancer［J］. Ann Oncol, 1996,7(1):75-79.
［6］Narasaki F, Matsuo I, Ikuno N et al. Multidrug resistance-associated protein (MRP) gene expression in human lung cancer. Anticancer Res ［J］,1996,16(4A):2079-2084.
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