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人疱疹病毒-8型致病作用研究进展
国外医学病毒学分册 1999年第6卷第1期
上海医科大学微生物学教研室 （上海200032）钱利生综述
卡波济肉瘤（KS）为一种内皮细胞增生性恶性肿瘤。流行病研究表明，KS由传染性病原体引起，并怀疑与病毒感染有关。1994年，Science首次报道美国哥伦比亚大学Chang等采用差异性分析法，在AIDS相关KS组织中发现两段疱疹病毒样DNA序列，称为卡波济肉瘤相关的疱疹病毒样序列（KSHV）。核酸序列分析表明，KSHV与喉疱疹(herpesvorus saimiri,HVS)和EBV同属于γ疱疹病毒亚科Rhadinovirus属内的成员，定为人疱疹病毒-8型（HHV-8）。
1 HHV-8的DNA序列
Chang等[1]应用差异性分析，在AIDS的病损组织中检出两段DNA序列，定为KS330Bam和KS631Bam。KS330Bam有330个bp,G+C为51%，与HVS和EBV衣壳蛋白VP23分别有51%和39%的氨基酸同源性。KS631Bam有631个bP，G+C为63%，与HVS和EBV的包膜蛋白具有同源性。两段序列在AIDS-KS损伤组织中的检出率达90%以上，但在有或没有AIDS的非KS组织中检出率极低，提示该两段DNA为外源性DNA，而不是宿主细胞的基因组。
1996年，Moore等[2]应用BC-1淋巴细胞系，通过电泳观察DNA的分子大小，提出HHV-8DNA约为270Kb。其中20.7Kb完成测序和序列分析，发现有17个开放读码杠架ORFs与γ2-疱疹病毒的基因同源，分别编码衣壳蛋白、胸苷激酶和gH蛋白。应用感染细胞抗原，能检出KS病人血清中的特异性抗体。同年Russo[3]对BC-1细胞系中的HHV-8DNA作序列分析，发现BC-1 HHV-8基因组结构与HVS相似，有一独特区，长140.5Kb，G+C含量约为53.5%，两侧有末端重复区，由多个直接重复单位组成，每一直接重复单位长约801bp,G+C为84.5%，合计BC-1中HHV-8基因组全长约210Kb。独特区至少有81个ORFs和5个内重复区，其中66个ORFs与HVS oRFs同源。病毒基因组除编码结构蛋白和代谢相关蛋白外，还能编码多种细胞同系物，包括补体结合蛋白、神经细胞粘附分子样蛋白、巨噬细胞炎症因子、Bcl-2、干扰素调节因子IL-8受体、D型细胞周期素和二氨叶酸还原酶等。
1997年，Engelbrecht等[4]应用单股构型多态性分析（SSCP），研究HHV-8 dNA的构型变化，与KS330Bam原型序列相比，5例KS病例的KS330Bam片段部有点突变的发生。4处硷基转换为G→T、A→C和两个A→G；两处硷基转换为C→T。其中3处点突变引起氨基酸的改变，突变的意义尚需深入研究。
2 病毒基因与致病的关系
DNA序列分析发现，HHV-8的若干ORFs与细胞基因同源[5]，能编码干扰免疫系统蛋白，参与核酸代谢的酶和细胞生长调节因子等。参与病毒的致癌作用。
HHV-8 IL-6（Viral IL-6,v-IL-6）的氨基酸序列有24.7%与人IL-6相同[6]。IL-6能与细胞受体结合，促进IL-6依赖细胞系的生长。人重组IL-6能促进KS细胞生长，可能与KS的致病有关。v-LI-6对KS的致病作用研究发现，在体外培养的KS纺锤形细胞能表达高亲和力的IL-6受体，而HHV-8相关的淋巴细胞增生性疾病则能表达v-IL-6。v-IL-6能阻止鼠杂交瘤B9细胞系的凋亡，可能与B细胞淋巴瘤和多灶性卡斯特莱曼病的致病有关。
HHV-8 MIP（macrophage iflammatory protein）的氨基酸有30%与人MIP同源[7]。按胱氨酸（C）排列基序（mtoif），具有C-C结构的双半胱氨酸蛋白包括MIP-1α和MIP-1β，其主要功能是吸引单核巨噬细胞。实验证明vMIP-1能抑制HIV-1感染细胞，提示HHV-8和HIV-1感染之间的相互联系。
HHV-8 D型周期素[8]有32%的氨基酸与HVS周期素同源，31%与细胞周期素同源。细胞D型周期素至少与4种周期素依赖激酶有关，即Cdk2、Cdk4、Cdk5和Cdk6。病毒周期素与Cdk6相关。在淋巴样细胞中，周期素主要与Cdk6激酶结合，引起抗癌基因产物视网膜神经胶质瘤蛋白和细胞组蛋白H1磷酸化，使细胞通过G1期而逃避细胞对G→S期过滤的监控。在KS损伤组织的淋巴细胞，纺锤形细胞和体腔淋巴细胞瘤中均有HHV-8的存在，而HHV-8周期素对Cdk6激酶的特性与HHV-8的嗜淋巴细胞和引起淋巴细胞转化的特性相一致。
凋亡的诱导是宿主细胞对病毒感染的典型反应。许多病毒具有抑制凋亡的基因，有助于病毒逃避细胞的凋亡反应。象EBV和HVS一样，HHV-8带有细胞Bcl-2同系物基因[9]，基因产物Bcl-2和Bax、Bik等蛋白结合，产生Bcl-2和Bax异两聚体结合物能有效阻断Bax介导的细胞调亡，延长持续感染细胞的生存时间。在各种人类肿瘤中，已证明Bcl-2表达的失调，Bcl-2的过滤表达，可通过抗凋亡引起致癌作用。也有报道[10]HHV-8 bcl-2不与Bax等蛋白结合，因而不受这类蛋白的负调作用影响而显示其抑制功能。Thome等[11]报道另一种凋亡抑制蛋白，即病毒FLICE抑制蛋白（viral fLICE-inhibitory proteins,FLIPs）γ-疱疹病毒包括HHV-8具有vFLIPs，能干扰由死亡受体介导的细胞凋亡，引起持续感染和产生肿瘤。
1997年，Neipol等[12]提出HHV-8可能有5种致病假设：（1）过路病毒假设，认为HHV-8为一种常见的持续感染病毒，在肿瘤组织中可被单独激活但不致病。（2）危险因子模式认为HHV-8与KS致病有关，但不是必需病毒。（3）必需辅助因子理论提出HHV-8为KS的常见病毒，但在KS的致病中，其他因子起重要作用。（4）双重因子假设则认为，HHV-8为一类少见的性传播病毒，当与免疫抑制者（AIDS）和/或有遗传倾向者相连时，成为引起KS的决定性病毒。（5）内源性转化病毒学说则提出，HHV-8为一种罕见病毒，感染可引发KS。5种假设各有优缺点，但双重因子理论最具吸引力，按照双重因子假设，HHV-8为KS的感染因子，免疫抑制有助于病毒增殖，导致KS的发生。
3 HHV-8与相关疾病
KS是内皮细胞增生性恶性肿瘤，根据流行病学研究，可将KS分为古典型卡波济肉瘤（classic kS,CKS），非洲型卡波济肉瘤（african KS,AKS），流行性卡波济肉瘤（epidemic kS,EKS）和医源性卡波济肉瘤（iatrogenic KS,IKS）。CKS为地中海沿岸居民和东欧系犹太人群中的稀见肿瘤，病程比较缓慢；AKS为非洲撒哈拉沙漠以南黑人的常见肿瘤；EKS为AIDS的独特并发症，病程进展较快，多在两年内死亡；IKS主要指与使用免疫抑制剂治疗相关的KS，多发生于器官移植患者[13]。KS虽有不同的流行病学和临床表现，但都有相同的组织学表现。AIDS病人中KS的流行病研究提示，除HIV外，另一种性传播感染因子与致病作用有关。在美国，AIDS-KS发病率比普通人群高20000倍，免疫抑制人群比健康人高600倍。应用PCR检测KS330Bam和KS631Bam两段DNA片段，来自AIDS-KS组织，90%以上含有HHV-8 dNA，非AIDS活检组织均为阴性，但在AIDS的非KS组织中，HHV-8 DNA阳性率为15%[14]，而且在AIDS-KS患者血清中可检出抗HHV-8。认为HHV-8为引起KS的病原体。
多灶性卡斯特莱曼病（multifocal castleman's disease,MCD）是一种罕见的淋巴细胞增生性疾病[15]，但在KS患者中，MCD的发生较为常见。与AIDS相关的MCD中常能检出HHV-8 dNA。
与AIDS相关的体腔淋巴瘤（AIDS- associated body cavity-based lymphoma,BCBL）为淋巴样细胞肿瘤[16]。应用PCR和Southern印迹法检查，HHV-8 dNA都为阳性。研究结果表明HHV-8为嗜淋巴细胞病毒，感染后能促进细胞增生，可形成淋巴瘤。
1997年，Albert等[17]从结节病（类肉瘤病，sarcodosis）组织中检出HHV-8DNA，在39份结节病的肺、淋巴结及口腔组织标本中，经PCR扩增，其中38份为HHV-8 oRF26 DNA阳性，阳性率为97.43%。38份阳性标本中，31份标本HHV-8 oRF25 DNA也为阳性。59份非结节病标本，仅7份为HHV-8 ORF26 DNA阳性。因此认为HHV-8结节病密切相关，是否为结节病病原体尚需进一步研究。
4 结语
关于HHV-8的致病机理，诸多学者[18-20]认为HHV-8感染B淋巴细胞亚群，引起B细胞的增生反应，导致细胞恶性转化，或是HHV-8感染细胞后，促使细胞因子的产生，引起细胞增生，其中内皮细胞的增生引起KS，上皮细胞的增生导致鳞状细胞癌的发生，而B细胞的增生则发展为淋巴细胞瘤。1998年，Sarid等研究BC-1细胞中HHV-8基因转录，发现有3类病毒基因转录。Ⅰ类基因有病毒周期素、潜伏相关核抗原和vFLIP基因，不受TPA（tetradecanoyl phorbol acetate）诱导的影响，在标准生长条件下能连续转录。Ⅱ类基因聚集在基因组的编码区，包括小的聚A rNAs以及大多数病毒编码的细胞因子和信号转录基因，无需TPA处理，Ⅱ类基因也能转录，但若用TPA处理，可诱导较高水平的转录。Ⅲ类基因包括初级结构基因和复制基因，仅用TPA处理能转录，推测与溶介性毒粒产生有关。随着3类病毒基因转录的深入研究，有助于从分子水平论述HHV-8的致病机理，为有效预防和治疗HHV-8的感染开辟新途径。
参考文献
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3 Russo J, et al. Proc Natl Acad Sci uSA,1996；93:14862-14867
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5 Nicholas J, et al. J Virol,1997；71:1963-1974
6 Neipel F, et al. J Virol,1997；71；839-842
7 Mip Nichals J. Nat Med,1997；3:287-292
8 Chang Y, et al.Nature,1996；382:410-411
9 Godden-Kent D, et al. J Virol,1997；7(16):4193-4198
10 Sarid J. Nat Med,1997；3:293-298
11 Thome M, et al.Nature,1997；386:517-521
12 Neipel F, et al. J Virol,1997；6:4187-4192
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18 Levy JA.Lancet,1995；34:799
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20 Lagunoff M, et al.Virol,1997；236:147-154
21 Sarid R, et al. J Virol,1998；72:1005-1012
校对时间：99-12-08惠冬莉
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