碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗Hepama-1注射液对小鼠的急性毒性试验

　　中国新药杂志1999年第2期

　　来文　谢弘　王根凤　王放　董晓琴　聂金荣　施张奎　陈云祥　孙性善

　　 摘要　目的：碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗 hepama-1 注射液及其肝癌细胞膜单抗 Hepama-1溶液注射小鼠后的急性毒性试验。方法：小鼠一次尾静脉注入肝癌细胞膜单抗 hepama-1 溶液 0.4 mg单抗 /20g 或碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗 hepama-1 注射液74MBq/20g，观察小鼠的急性毒性反应。结果：试验组鼠全部存活，一般状态正常，体重增长，未见明显急性毒副反应。结论：该药品及其载体在指定的给药方式条件下，在小鼠体内没有引起明显的急性毒副反应。

　　 关键词：碘［¹³¹I］人肝癌单克隆抗体注射液　人肝癌单克隆抗体溶液　急性毒性试验

　　以单抗为载体之放射性碘标记物的动物急性毒性试验研究资料对评估这一类药物是否可以进入临床研究无疑是非常重要的。迄今仅见到 kramer K 等^［1］对患有神经外胚层起源的肿瘤的猴子所致的急性毒性试验报道。本文报告了碘［¹³¹I］人肝癌单克隆抗体注射液及其载体注射小鼠后的急性毒性试验，结果表明所指定的剂量及给药方式尚无引发明显急性毒副反应之虞。

　　材料与方法

　　1　材料

　　Balb/C小鼠，由上海市实验动物中心提供,体重为19～20 g，雌雄各半，用于载体的急性毒性试验。ICR小鼠，由浙江省实验动物中心提供,体重为19～20 g，雌雄各半，用于制剂的急性毒性试验。

　　肝癌细胞膜单抗 Hepama-1 溶液^［2］，浓度为 1 mg/ml，中国科学院上海细胞生物学研究所提供。碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗 hepama-1 注射液^［2,3］，比放射性为184.63 MBq/mg，放射浓度为185 MBq/ml，放射免疫特异结合率为 45％，中国科学院上海细胞生物学研究所提供，临用时,以灭菌生理盐水稀释成所需浓度备用。

　　2　方法

　　参照卫生部药审办颁布的“人用鼠源性单克隆抗体制备及质量控制要点”的要求，进行本试验。

　　2.1　载体(单克隆抗体)的急性毒性试验　

　　据临床推荐的治疗方案(5 mg/次，一次经血管注射)，设定肝癌细胞膜单抗Hepama-1溶液的小鼠单次剂量为20 mg单抗/kg，相当于临床人用剂量的200倍(50 kg/人，剂量按公斤体重计算)。设试验组和对照组，每组小鼠24只，雌雄各半。试验鼠一次尾静脉注入0.4 mg单抗/20g，容量为0.4 ml；对照鼠给予等量生理盐水。给药后即刻，此后每隔1 h观察记录小鼠的一般状态(包括对外来刺激的反应、活动行为、呼吸、痉挛、皮毛、排泄物等)、有无死亡及死亡过程。给药后24 h各组处死雌雄小鼠各2个，剖检观察有无肉眼可见病变，如有病变应作病理切片检查。其余小鼠连续观察14 d，每日观察1次，隔日称重1次。

　　2.2　制剂的急性毒性试验　

　　据临床推荐的治疗方案（925 MBq/次，比放射性 185 MBq/mg，一次经血管注射），设定碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗Hepama-1注射液的小鼠单次剂量为3 700MBq/kg，相当于临床人用剂量的 200倍。设试验组和对照组，每组小鼠 24只，雌雄各半。试验前小鼠饮0.1%KI 溶液代饮水 2 d，以封闭甲状腺。试验鼠一次尾静脉注入74MBq/20 g，容量为 0.4 ml；对照鼠给予等量生理盐水。给药后即刻，此后每隔1 h观察记录小鼠的反应，观察方法及指标同载体的急性毒性试验。

　　结果

　　1　载体（单克隆抗体）的急性毒性试验

　　小鼠一次尾静脉注射相当于临床推荐剂量200 倍的肝癌细胞膜单抗 Hepama-1 溶液后,一般状态良好,与对照组小鼠无明显差异。静脉注射24 h后剖检，肉眼未观察到病变。无论摄食、体重，试验组小鼠同对照组无任何明显差异，试验组鼠全部存活，一般状态正常，体重增长，未见明显毒副反应。

　　2　制剂的急性毒性试验

　　小鼠一次尾静脉注射相当于临床推荐剂量 200 倍的碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗Hepama-1注射液后，一般状态良好，与对照组小鼠无明显差异。静脉注射24 h后剖检，肉眼未观察到病变。试验组小鼠仅于给药后2～5 d出现一过性摄食减少,体重下降，此后体重逐步恢复正常增长。在14 d的观察期内，试验组小鼠各时间段的体重虽明显低于对照组鼠(P＜0.001，见表1)，但试验组鼠全部存活，一般状态正常，体重增长，未见明显毒副反应。

表1　¹³¹I-抗人肝癌单克隆抗体对小鼠急性毒性试验期间体重的影响(x±s)

　　讨论

　　本试验包括载体及制剂两部分，结果表明：无论是碘［¹³¹I］肝癌细胞膜单抗Hepama-1注射液，还是肝癌细胞膜单抗 hepama-1溶液，在指定的给药方式条件下，在小鼠体内没有引起明显的急性毒副反应。Kramer k等^［1］曾报道一种单克隆抗体的碘标记物对患有神经外胚层起源的肿瘤的猴子可引起体重减轻、发热甚至轻瘫的毒副反应，但他们所用的剂量高达19～48 Gy，反复注射7次。又据美国1997年FDA的有关规定，作为载体的单克隆抗体似不需要进行急性毒性试验观察，因我国尚未有新的文件规定，故仍依1990年卫生部文件进行。

　　作者单位：中国科学院上海细胞生物学研究所，上海 200031

　　聂金荣　施张奎　陈云祥　孙性善　浙江省实验动物与安全性重点实验室

　　参考文献

　　[1]　Kramer K,Cheung NK,Humm j.Pharmacokinetics and acute toxicology of intraventricular 131 I-monoclonal antibody targeting disialoganglioside in non-human primates.J neurooncol,1997,35(2)∶101

　　[2]　谢弘，杨正洪，陈瑞铭，等.分泌人体肝癌单克隆抗体得两个小鼠杂交瘤株及其抗体的专一性分析.实验生物学报，1985，18(2)∶263

　　[3]　Zhao-Chong,Zhao-You Tang，Hong Xie.Radioimmunotherapy for unresectable hepatocellular carcinoma using ¹³¹　I-Hepama-l mAb:preliminary results.Cancer Research Clinical Oncology,1993,119∶257