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AP胶囊毒性和致突变性研究
卫生毒理学杂志 1999年第1期第13卷 健康保键
作者：陈冠敏 姜瑞钗 范福荣 陈韧雄 林健
单位：福建省卫生防疫站 (福州 350001)
AP胶囊是从菇料中分离获得的一种菌制剂，该菌及发酵物含丰富的多糖、氨基酸、亚油酸等不饱和脂肪酸及维生素、微量元素，经动物试验具有调节血脂等多种功能，正作为保健食品首次被开发利用。为此我们进行了整体和离体的毒性试验。
材料与方法
1.样品：AP菌粉与发酵物制成黄白色粉末。
2.试验动物：昆明种小鼠体重22～25g，由福建省动物实验中心提供，断乳SD大鼠购自中科院上海实验动物中心。
3.致突变性试验［1，2］：(1) Ames试验：选用标准的平板掺入法在加与不加S9的条件下进行，实验设3个剂量：100，50，25μg/皿，另设阴性(蒸馏水)、阳性对照组，阳性物：2-AF，2、4、7-TNFone,NaN3,MMC。实验结果以各剂量组平均回变菌落数与自发回变菌落数的比值(MR)来判断。(2) 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：选用昆明种小鼠每组10只，雌雄各半，受试物设3个剂量：5，10，20mg/kg及阴性(蒸馏水)、阳性(CP100mg/kg)对照组，动物以0.02ml/g灌胃，按常规进行实验。(3) 小鼠精子畸形试验：选用昆明种小鼠每组5只，受试物设3个剂量：5，10，20mg/kg及阴性(蒸馏水)、阳性(CP40mg/kg)对照组，动物以0.02ml/g灌胃，按常规进行实验。
4.大鼠90天毒性试验：动物按体重随机分成4组，每组20只，雌雄各半，受试物设3个剂量，3.75，7.5，15g/kg，拌入饲料喂养，另设阴性对照组(基础饲料)。平均体重雌鼠为(69.25±4.36)g，雄鼠为(70.27±3.52)g，单笼喂养，自由进食饮水，实验期间观察动物一般状态，每周称体重，记录饲料消耗量。喂养45，90天时，尾静脉采血作血常规及生化指标：血清谷丙转氨酸、尿素氮、总蛋白、白蛋白等测定，实验结束时取肝、肾称重，计算脏器系数，同时取出肝、肾、脾、胃作组织病理学检查。
病理检查几种阳性判断标准：
贲门与胃炎症细胞浸润：指的是在粘膜层中出现炎细胞，其表现为有小堆聚集者方计为阳性。
肝脂变：肝细胞胞浆出现微小空泡直径不到一半者均不计，只要切片中发现肝细胞胞浆空泡直经大于1/2胞核者定肝脂变为阳性(但数量并不重要，即不一定要多少肝细胞大空泡才列为“阳性”)。
脾小体数目增生：表现为(1)脾小体数目增多或(2)脾小体出现融合现象。
5.数据处理：用spss软件进行t检验。
结果与讨论
1.致突变性试验：
(1) Ames试验：在加S9和不加S9代谢活化系统的条件下，实验各剂量组的MR值TA97：0.765～1.269，TA98：0.799～1.254，TA100：0.885～1.056，TA102：0.769～1.140，4个指示菌阳性组的MR值：4.003～52.174，受试物各组回变菌落数的MR＜2。提示基因突变检测结果为阴性。
(2) 小鼠骨髓微核试验：结果显示阳性对照组微核率高达23.6‰～25.6‰，而各实验组的微核率在0.04‰～1.80‰，与阴性对照组(0.61‰～1.0‰)相比差异无显著性(P＞0.05)。
(3) 小鼠精子畸形试验：结果显示各剂量组的精子畸形率在1.00%～1.56%，与阴性对照组相近，而阳性对照组的精子畸形率高达6.82%，提示本试验结果为阴性。
2.大鼠毒性试验：
(1) 一般状态观察：实验组喂养的大鼠毛质白，有光泽，一般状态与阴性对照组比较无区别，也无死亡现象。
(2) 动物血常规检验：实验组和对照组45，90天动物血红蛋白、红细胞、白细胞分类均在正常值范围内，无明显差异(P＞0.05)。
(3) 动物血清生化学检验：各组动物两次采血所测的总蛋白、白蛋白、球蛋白、白/球比、血糖、胆固醇、肌肝等均在正常值范围，且差异无显著性(P＞0.05)。实验组动物谷丙转氨酶、谷草转氨酶指标均接近或低于阴性对照组，结果见表1。
表1 大鼠血清ALT、AST检测结果( ±s)(U/L)
| 剂量
g/kg |
ALT(1) |
AST(1) |
ALT(2) |
AST(2) |
| 雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
| 0 |
47.60±5.23 |
68.30±9.79 |
198.60±37.13 |
221.80±29.15 |
63.60±8.76 |
84.84±8.29 |
198.10±38.29 |
222.3±30.10 |
| 3.75 |
45.10±5.58 |
60.10±6.84 |
181.10±31.85 |
207.70±32.74 |
68.10±15.77 |
70.10±6.44 |
194.10±25.32 |
218.9±22.79 |
| 7.50 |
42.80±2.57 |
56.40±4.35 |
175.40±21.93 |
210.50±19.40 |
64.80±5.67 |
75.80±5.57 |
184.50±26.61 |
220.3±33.72 |
| 15.0 |
43.20±4.18 |
67.90±5.95 |
173.00±33.82 |
199.90±23.33 |
68.90±11.52 |
77.10±8.72 |
187.60±41.29 |
204.7±31.30 |
表中数字代表出现阳性的动物数
(4) 内脏观察及脏器系数:实验组与对照组动物心、肝、肾、脾、胃等内脏肉眼观察均正常。3个剂量组的脏器系数与阴性对照组相比均差异无显著性(P＞0.05)。
(5) 组织病理学检查：镜检可知实验组与阴性对照组动物的肝、肾、胃、脾变经近于相仿，且均无重要病理变化。实验组肝脏、肾脏指标还优于对照组(见表2)各组食道粘膜均无炎细胞浸润，而大多数动物贲门部胃粘膜出现轻度慢性炎细胞浸润。各组动物肝小叶结构完整，无纤维分离，未出现肝细胞浊肿、坏死等现象，各组少数动物虽出现轻度肝细胞脂变，但给药组动物比阴性对照组出现的例数少，且肝窦细胞均无增生。各组动物肾小球毛细血管、肾间质虽呈轻度充血，但肾小球无纤维化现象，肾曲管上皮呈轻度浊肿，对照组与给药低组动物均出现管型或钙化性结石，而中、高组却未出现(见表2)
表2 大鼠病理检查结果
| 剂量g/kg |
肝细胞脂变 |
肝汇管区炎细胞浸润 |
肾曲管上皮管型或结石 |
肾孟炎 |
脾小体增生 |
| 雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
雌 |
雄 |
| 0 |
5 |
3 |
4 |
1 |
1 |
1 |
3 |
3 |
4 |
8 |
| 3.75 |
1 |
1 |
4 |
0 |
1 |
1 |
3 |
2 |
7 |
8 |
| 7.50 |
3 |
1 |
1 |
0 |
0 |
0 |
1 |
2 |
5 |
2 |
| 15.0 |
1 |
0 |
2 |
1 |
0 |
1 |
2 |
1 |
2 |
5 |
从整体和离体试验结果可知：AP胶囊对体细胞及生殖细胞的遗传物质无致突变作用、对基因无碱基对置换和移码突变作用。毒性试验结果表明：AP胶囊对动物无毒副作用，建议可作为新资源食品进行开发利用。
参考文献
1.陈祖辉，等.环境致癌物生物系短期试验.北京：人民卫生出版社，1975，21～25.
2.黄幸舒，等.环境化学物致突变致畸致癌试验方法.杭州：浙江科学技术出版社，1985，13～46.216～235.264～270.
(修回日期 1998年5月)
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